小鼠抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增試劑盒

使用說(shuō)明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[產(chǎn)品信息]

本試劑盒可以用于對(duì)雜交瘤、小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞、小鼠脾細(xì)胞及小鼠其他組織中抗體可變區(qū)基因的擴(kuò)增。相關(guān)標(biāo)本前期需經(jīng)過(guò)mRNA提取和用oligo dt 為引物反轉(zhuǎn)錄成cDNA。本試劑盒通過(guò)對(duì)擴(kuò)增體系中的組分進(jìn)行了優(yōu)化，即保證了擴(kuò)增的特異性，又?jǐn)U大了對(duì)所有抗體基因的兼容性?？捎糜谌我怆s交瘤中鼠源抗體基因的擴(kuò)增，小鼠免疫后全部抗體基因的擴(kuò)增和小鼠抗體文庫(kù)的構(gòu)建。

[試劑組分] 

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
IS088-1	小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系	100ul
IS088-2	小鼠抗體輕鏈擴(kuò)增體系	100ul
IS088-3	Taq DNA聚合酶預(yù)混體系	500ul
IS088-4	陽(yáng)性對(duì)照	5ul

[適用范圍]

小鼠抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增

[儲(chǔ)存及有效期]

-20℃保存，有效期6個(gè)月。

[實(shí)驗(yàn)操作]

所有試劑融化后瞬時(shí)離心并放置于冰上，按下列組分配制反應(yīng)體系（以10ul為例）

1、擴(kuò)增抗體重鏈

名稱	體積ul
小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系	1
Taq DNA聚合酶預(yù)混體系	5
cDNA	a（含2-100ng DNA，約0.2-1ul）
H2O	4-a

備注：如需做陽(yáng)性對(duì)照，將cDNA換成1ul陽(yáng)性對(duì)照 (IS088-4) 即可。

2、擴(kuò)增抗體輕鏈

名稱	體積ul
小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系	1
Taq DNA聚合酶預(yù)混體系	5
cDNA	a（含2-100ng DNA，約0.2-1ul）
H2O	4-a

備注：如需做陽(yáng)性對(duì)照，將cDNA換成1ul陽(yáng)性對(duì)照 (IS088-4) 即可。

3、按下列條件擴(kuò)增

Temp	Time	Cycles
94℃	3min	1
94℃	30s	30
55℃	30s
72℃	45s
72℃	5min	1
4℃	∞	1

4、PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖電泳后，取350bp左右的DNA條帶為模板進(jìn)行二次PCR大擴(kuò)回收，經(jīng)TA克隆后測(cè)序即可獲得抗體可變區(qū)基因。

[注意事項(xiàng)]

1、試劑避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響擴(kuò)增效率；

2、建議采用新鮮標(biāo)本的cDNA為模板；

3、反應(yīng)體系的配置在冰上完成。